性転換篇の最大の醍醐味は、各キャラクターのあまりにも強烈なビジュアルギャップです。美少女化してファンを歓喜させたキャラもいれば、予想の斜め上を行く姿で爆笑を誘ったキャラまで、主要メンバーの変貌ぶりを振り返ります。
坂田銀時 → 坂田銀子
銀髪をツインテールに結んだグラマラスな美女へと変貌。普段の無気力さはそのままですが、着物の着崩し方やスタイルの良さから、ファンの間では「銀子さん」の愛称で絶大な人気を獲得しました。
志村新八 → メガネ（ピンクフレーム）
人間側の肉体変化ではなく、トレードマークであるメガネのフレームがピンク色に変わっただけという扱い。銀魂お約束の「新八の本体はメガネ」という公式設定が見事に炸裂しました。
神楽 → 筋骨隆々の巨漢イケメン
小柄な美少女から一転、拳王のような威圧感を放つ筋肉モリモリの男性に変化。声のトーンも含めて完全に別作品のキャラクターのような風格を漂わせました。
土方十四郎 → X子（極太マヨネーズ体型の豚足女）
多くのファンに最も大きな衝撃を与えたのが土方です。美男子だった面影は消え去り、長年のマヨネーズ過剰摂取がそのまま脂肪として具現化したような肥満体型の女性「X子」へと変わり果てました。
沖田総悟 → 総子（超絶美少女サディスト）
土方とは対照的に、栗色の髪をサイドテールにしたモデル級の美少女へと変貌。容姿端麗でありながら、ドSな言動とバズーカを構える凶悪さは健在で、視聴者を大いに沸かせました。
近藤勲 → 近藤ゴリ子（金髪褐色のグラマラス美女）
普段はゴリラ扱いされている近藤ですが、女体化後は金髪ショートカットの健康的なナイスバディ美女に。真選組の中では沖田と並ぶビジュアルの勝ち組となりました。
桂小太郎 → ヅラ子（清純派和風美女）
元々美形だったこともあり、艶やかな黒髪ロングの淑やかな美女に変身。本人は頑なに「何も変わっていない」と言い張るものの、女性リーダーとしての気品を無駄に発揮しました。
柳生十兵衛・月詠・猿飛あやめ
女性陣は全員が見事なイケメン男性へと変化。十兵衛は正統派の美男子剣士、月詠はホスト風の色気漂う着物男子、さっちゃんは長身メガネの執事風男性となり、女性ファンからも大反響を呼びました。
